DNA建庫(kù)方法大致可分為這幾種類(lèi)型
更新時(shí)間:2022-02-21 點(diǎn)擊次數(shù):3700
DNA分子的功能是貯存決定物種性狀的幾乎所有蛋白質(zhì)和RNA分子的全部遺傳信息,對(duì)DNA信息的解讀,對(duì)于我們研究生命的奧秘、疾病的機(jī)理等有著重要的意義。DNA類(lèi)的文庫(kù)主要分為:DNA小片段文庫(kù)、DNA大片段文庫(kù)、Exon文庫(kù)、PCR-Free文庫(kù)和單細(xì)胞文庫(kù)等。DNA建庫(kù)方法是分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)原理,其本質(zhì)就是在待測(cè)片段兩端加上接頭的過(guò)程。
DNA小片段文庫(kù)是指片段大小在1kb以下的普通DNA文庫(kù)(200bp、350bp、500bp等),DNA小片段文庫(kù)可用來(lái)進(jìn)行人重測(cè)序,動(dòng)植物、微生物的de novo和重測(cè)序,16s rRNA測(cè)序,宏基因組測(cè)序等項(xiàng)目類(lèi)型的文庫(kù)構(gòu)建。
DNA大片段文庫(kù),又稱(chēng)之為末端配對(duì)(mate-paired)文庫(kù),片段長(zhǎng)度大于1kb,主要用于動(dòng)植物,微生物的de novo測(cè)序。
PCR-Free文庫(kù),顧名思義,就是在文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程中不需要進(jìn)行PCR的文庫(kù)。主要是針對(duì)一些特殊樣本,比如GC含量高、PCR擴(kuò)增困難的樣本和PCR產(chǎn)物。不足之處在于所需的樣本起始量較少。
Exon文庫(kù):人類(lèi)外顯子組總共約30 Mb,占人類(lèi)基因組約1%,外顯子具有高度的保守型,且大部分疾病的致病位點(diǎn)位于外顯子區(qū)。外顯子測(cè)序是指利用序列捕獲技術(shù)將外顯子區(qū)域DNA捕捉并富集后進(jìn)行高通量測(cè)序的基因組分析方法。Exon文庫(kù)主要用于人全外顯子測(cè)序和目標(biāo)區(qū)域測(cè)序。
單細(xì)胞DNA文庫(kù):隨著二代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,把一次實(shí)驗(yàn)測(cè)許多條DNA序列的這個(gè)難題解決之后,一次把一個(gè)人的全基因組給測(cè)出來(lái),最極限的情況,就是樣本量少到一個(gè)細(xì)胞,就可以測(cè)出整個(gè)基因組的序列信息。
目前DNA建庫(kù)方法按照接頭連接方式不同可分為五類(lèi):
1、PCR擴(kuò)增子建庫(kù);
2、Swift法建庫(kù);
3、轉(zhuǎn)座酶法建庫(kù);
4、TA克隆連接接頭建庫(kù);
5、平末端連接接頭建庫(kù)。